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組換え大腸菌鞭毛分泌装置を用いたポリペプチドの細胞外分泌

2005年4月1日 Nature Biotechnology 23, 4 doi: 10.1038/nbt1077

本研究では、異種ポリペプチドを大腸菌増殖培地に分泌させるための組換え鞭毛III型分泌装置を開発した。この分泌は、fliC遺伝子（フラジェリンをコードする）の上流にある173 bpの非翻訳DNA断片を、fliCの転写ターミネーターとともに、目的のポリペプチドをコードする遺伝子に融合させることによって促進させた。Campylobacter jejuni（長さ262残基）、Streptococcus phneumoniae（434残基）、Staphylococcus aureus（115残基）、およびN末端FliCハイブリッドタンパク質（たとえば238残基の真核生物緑色蛍光タンパク質）に由来するポリペプチドが、濃度1〜15 mg/lで増殖培地に分泌された。この発現タンパク質は全分泌タンパク質の過半を占めた。外来タンパク質を大腸菌に細胞外分泌させて得られるタンパク質の収量は、これまで約100 ｵg/lと低かった。この方法の利点は、分泌タンパク質の濃度および純度に加え、タンパク質の長さおよび由来の自由度にある。

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